A aplicação de QuEChERS na Extração de Esteróides Anabolizantes em Sangue Total

Esteroides anabolizantes são drogas estruturalmente ligadas ao anel do sistema cíclico e se comportam de maneira parecida com a testosterona no corpo. Anabolizantes esteroides são usados terapeuticamente para estimular o crescimento dos músculos e aumentar o apetite, induzir a puberdade masculina e tratar de cansaço crônico, como câncer e AIDS. O uso ergogenico de esteroides é feito normalmente por bodybuilding, dopping esportivo e engorda de animais. O desenvolvimento de um método analítico para esteroides anabólicos em complexo biológico efetivo, rápido e simples é de grande interesse para testes clínicos de antidopping e segurança de alimentos.

Essa aplicação utiliza a técnica QUEChERS original não-buffered (Acrônimo de Rápido, Fácil, Econômico, Eficaz, Robusto e Seguro) para quantificar os esteroides anabolizantes no sangue total humano. Técnicas de extracção anteriores implicavam tipicamente um passo de precipitação de proteína seguido por extracção líquido-líquido (LLE) ou extracção em fase sólida (SPE 1 mL de amostra de sangue total humano é extraído utilizando 2 mL de acetonitrilo (MeCN). 400 mg de sulfato de magnésio (MgSO4) e 100 mg de cloreto de sódio (NaCl) são utilizados para aumentar a separação de fases e a partição de esteróides anabólicos na fase orgânica (MeCN), não é necessária precipitação de proteínas quando se utiliza QuEChERS para amostras de sangue. Após agitação e centrifugação, 1 mL de resíduo sobressalente é purificado utilizando um tubo SPE dispersivo de 2 mL contendo 150 mg de MgSO4 e 50 mg de PSA. O MgSO4 absorve a água residual da extração, enquanto que o PSA remove os ácidos orgânicos e outros co-extractivos da matriz, resultando num extracto limpo para análise de LC-MS / MS.

Para a quantificação de esteroides foram construídas curvas de calibração com matrizes. O resultado para os 12 compostos representativos foram lineares com R2 superior a 0,999 na faixa de concentrações de 10-500 ng/mL. Foram obtidas excelentes recuperações (81,4 – 101,6%) e desvios padrão relativos (RSD <10%). Este método foi aplicado a 6 amostras de sangue total real, não os esteróides foram detectados acima do limite de quantificação de 10 ng/mL.

O MgSO4 absorve a água residual no extracto, enquanto que o PSA remove os ácidos orgânicos e outros co-extractivos da matriz, resultando num extracto limpo para análise de LC-MS / MS.
Para a quantificação de esteróides foram construídas curvas de calibração com matriz. As respostas para os 12 compostos representativos foram lineares com R2 superior a 0,999 na gama de concentrações de 10-500 ng / mL. Foram obtidos excelentes resultados (81,4 – 101,6%) e desvio padrão relativo (RSD <10%). Este método foi aplicado a 6 amostras de sangue total real. Não foram detectados esteróides acima do limite de quantificação de 10 ng / mL.

Autorização: SPEX Sample Prep.

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