Efeitos moleculares da poluição em amostras de cetáceos usando o citocromo P450, CYP 1A1, 1A2 e 1B1 como biomarcadores

A Ocean Alliance se dedica à conservação das baleias e do meio ambiente oceânico por meio de pesquisa e educação. A Ocean Alliance completou recentemente uma viagem de pesquisa de cinco anos ao redor do mundo conhecida como a Viagem da Odisséia (2000 a 2005). A Voyage of the Odyssey foi lançada para atender à necessidade de um conjunto de dados globalmente integrado, permitindo uma análise consistente da exposição e dos efeitos potenciais de organoclorados persistentes e outros poluentes na vida marinha.

Muitos mamíferos marinhos abrigam grandes reservas de gordura em seu corpo, onde altos níveis de organoclorados e outros contaminantes lipofílicos podem se acumular. Mamíferos marinhos estão sujeitos a bioacumulação e biomagnificação desses contaminantes solúveis em gordura devido à sua vida útil relativamente longa e alta posição trófica nas cadeias alimentares marinhas . Portanto, os mamíferos marinhos podem ser considerados candidatos ambientalmente relevantes para uso como espécie sentinela ao avaliar a poluição marinha. O cachalote (Physeter macrocephalus) foi escolhido como a espécie indicadora da Viagem da Odisséia. Um total de 960 amostras de pele e gordura de cachalote e mais de 100 amostras de peixes predadores foram coletadas durante a viagem.

O programa de toxicologia da Viagem da Odisséia abrange muitos projetos. O projeto de biomarcador foca no uso das enzimas do citocromo P450 1 (CYP1). As enzimas CYP1 podem metabolizar e / ou ativar poluentes ambientais, como bifenilos policlorados (PCBs) e hidrocarbonetos aromáticos policíclicos (PAHs). Em muitas espécies animais, a indução do CYP1 é usada como um biomarcador de exposição e efeitos moleculares aos contaminantes acima. Recentemente, validamos o biomarcador CYP1 em cetáceos (Godard et al., 2004).

O objetivo do nosso projeto é a investigação dos efeitos moleculares da poluição em amostras de cetáceos usando o citocromo P450 CYP 1A1, 1A2 e 1B1 como biomarcadores. Nossos métodos incluem o sequenciamento do RNA, a clonagem e a quantificação da expressão dos 3 genes CYP em biópsias de pele de cachalote. As amostras de pele de cachalote disponíveis para este projeto de biomarcador em particular pesam apenas entre 50-100ug. A quantidade de RNA total que pode ser extraída dessas pequenas amostras é baixa; portanto, investigamos o uso do SPEX Freezer / Mill para aumentar a quantidade de RNA total que pode ser extraído de cada amostra e sua qualidade.

Para moer osso no frasco padrão 6751, recomendamos cortá-lo antes de moer em pedaços de aproximadamente 5 mm de diâmetro ou menores. A quantidade a ser triturada em um Frasco 6751 pode variar de menos de meio grama a quatro ou cinco gramas, dependendo da tenacidade da amostra e do tamanho das peças. O tamanho ideal da amostra e a quantidade para suas amostras devem ser determinados empiricamente. Pode ser possível triturar um ou dois pedaços grandes de osso de cada vez – por exemplo, um pedaço de 2 gramas em uma extremidade do frasco – mas a uniformidade dos resultados será melhor e haverá muito menos risco de rachaduras um cilindro se o osso for cortado em pedaços menores primeiro.

O SPEX Freezer / Mill tem sido um recurso substancial para nossa pesquisa, permitindo o isolamento do RNA total de nossas pequenas amostras de tecido com qualidade aprimorada e menos degradação do que as técnicas anteriores.

Referências
Godard et al. (2004). Indução do Citocromo P4501A1 de Cetáceos pela Exposição de Fatias de Biópsia de Pele -naphtho avone. Ciências Toxicológicas. 80, 268-275. SPEX