Interrupção mecânica para extração de ácido graxo de alto rendimento de amostras de tecido animal

A homogeneização mecânica para extração de ácidos graxos é tradicionalmente realizada com Ultra-Turrax em solução tampão. No entanto, tanto a purificação quanto o lento processo de preparação da amostra no laboratório analítico são trabalhosos. Este método não é mais adequado para alto rendimento de amostra. Portanto, faz sentido combinar o aumento do rendimento da amostra com a interrupção mecânica da célula. O uso de placas de microtitulação de 96 poços e placas de poços profundos é adequado para este processo. A pesquisa em biotecnologia / tecnologia genética também exige frequentemente o manuseio de um número considerável de amostras. A preparação da amostra costuma ser o gargalo no processo de trabalho de análise eficiente. Até agora, os esforços para romper mecanicamente as células por meio da moagem têm sido baseados na modificação dos moinhos tradicionais de bolas ou giratórios com um adaptador para placas de microtitulação. O Geno / Grinder é um moinho de bolas especialmente concebido para o rompimento de células de sementes de plantas, mas também pode ser usado para amostras de animais e humanos.

Duas placas de poços profundos (PP), usadas para coleta e armazenamento de materiais biológicos com poços de 1,5 – 2ml, foram colocadas lado a lado no conjunto de braçadeira Geno / Grinder. O músculo ou fígado de rato liofilizado foi colocado em cada poço da placa e adicionado de tampão KH2PO4 100 mM a pH 2 ou ácido tricloroacético. Em seguida, duas bolas de moagem foram adicionadas. Quando todos os poços foram preenchidos, a placa foi coberta com uma esteira de vedação. Assim preparadas, as placas de poços profundos foram fixadas no Geno / Moedor. As amostras foram agitadas vigorosamente durante um minuto a 1700 golpes por minuto. Isso resultou em uma dispersão de amostra fina e homogênea dentro de cada poço. Devido ao movimento vertical das pinças Geno / Moedor, todos os poços são movidos uniformemente. Isso resulta em rendimentos de homogeneização uniformes e reproduzíveis para todas as amostras.

Os resultados mostram que o Geno / Grinder é adequado para o rompimento de células de músculos e órgãos internos, ou seja, o fígado. No entanto, a qualidade dos resultados depende dos acessórios de retificação. Usar vários pequenos grânulos de óxido de zircônio com um diâmetro de 2 mm não dá um resultado satisfatório. A força bruta não é suficiente para triturar o tecido muscular congelado. Em contrapartida, foi possível homogeneizar com sucesso o material congelado com esferas de moagem de aço inoxidável de 4 mm de diâmetro.